技術原理
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic
Repeats）是最新出現的一種由sgRNA指導Cas核酸酶對靶向基因進行特定DNA修飾的技術。在這一系統中，sgRNA引導序列靶定位點剪切雙鏈DNA達到對基因組DNA 進行修飾的目的。CRISPR/Cas9系統能夠對小鼠基因組特定基因位點進行精確編輯，目前瑞思元已經成功將此技術應用于小鼠基因敲除/敲入模型制備，以及條件性敲除（Loxp系統）模型制備。
目前瑞思元采取優化過的野生型Cas9和雙切口Cas9n（Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn）。采用優化過的雙切口Cas9n(OCASn)可以將脫靶效應降到最低。
H11位點定點過表達
H11位點（也叫Hipp11）位于小鼠第11號染色體，是 Eif4enif1與Drg1 這兩個基因之間的一個位點，由于H11位點位于兩個基因之間，外源基因插入后對內源基因表達的影響很小，同時H11位點所在的Eif4enif1與Drg1這兩個基因的側翼序列區域具有廣泛的空間和時間EST表達模式，能夠使整合在此的外源基因受指定啟動子的驅動而穩定表達。該位點的純合敲入小鼠可正常發育和繁殖。
利用CRISPR/cas9系統可以在H11位點構建條件性基因過表達小鼠模型，即廣泛型強啟動子pCAG與外源目的基因cDNA之間用loxP-stop-loxP結構隔開，只有與組織特異性Cre工具鼠交配后，才會在特異細胞或組織中表達目的基因。
運用
用于人類基因功能、蛋白功能的過表達研究
技術優勢
研發周期：4-6個月；
按設計精準插入；
基本保證過表達；
遺傳穩定性高；
無需篩選，直接用于分析
制備流程
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